pgl3-PGl3在实验中

摘要： 本文目录一览：1、细菌活化可以用通用培养基吗2、...

本文目录一览：

• 1、细菌活化可以用通用培养基吗
• 2、pgl2-basic和pgl3-basic的区别
• 3、PGI3是什么?有什么作用?
• 4、如何利用pGL3质粒验证一段DNA序列是否具有启动子活性?
• 5、双荧光素酶笔记
• 6、怎么预测miRNA的下游蛋白

细菌活化可以用通用培养基吗

1、液体的最常用的有LB和LA培养基。之前我用LB液体的培养过TOP10，BL21。也培养过PEGFN1，PGL3，PET28A等等 实验室里也有人永LA来培养这些。

2、按照说明书的培养基配方配制液体培养基（如果没有具体要求，一般细菌培养用LB培养基），分装于3个三角瓶中，比如：150毫升的三角瓶，每瓶装50毫升培养基，灭菌，冷却至室温。

3、不能，因为不同微生物营养类型不同，对营养物质的要求也各不相同，因此，需要配制不同种类的培养基。一般培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用马铃薯培养基。

4、实验室常用的培养细菌的培养及基：检测用营养琼脂培养基，大量扩繁可以用lb培养基，都可以买成品，按照包装上的说明加水配制，然后高压灭菌就可以了，也可以自己配。看你做什么用了，可以配成液体的或者固体的。

5、给细菌培养、复壮、增菌可以用普通肉汤培养基。配置方法：将新鲜牛肉（去除结缔组织和脂肪）400g绞碎加水，4℃过夜。加热100℃1h，用数层纱布或滤纸过滤，加水补充至1000ml。

pgl2-basic和pgl3-basic的区别

1、其属于一种荧光素酶报告基因。荧光素酶报告基因为以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光。

2、先连接T载体是为了提高转化效率一般来说市面上出售的T载体都进行了优化，容易连接片段（也就是效率较高），因此构建表达载体时有时会先连接T载体。同时T载体的测序引物比较明确（商业化的缘故），因此测序也方便一些。

3、荧光素酶报告基因为以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光。

PGI3是什么?有什么作用?

有降血脂、防治冠心病等治疗作用。脂肪酸是最简单的一种脂，它是许多更复杂的脂的组成成分。脂肪酸在有充足氧供给的情况下，可氧化分解为CO2和H2O，释放大量能量，因此脂肪酸是机体主要能量来源之一。

EPA在环氧化酶和脂氧化酶的作用下生成LTXAPGI3等生物活性物质。 α—亚麻酸和亚油酸在代谢中竞争同一种酶，是竞争抑制性关系，保持两者之间平衡比例，是维系健康的基础。

α-亚麻酸在人体内可调节脂类代谢，抑制并发症，降低酸、酮中毒的机率。同时α—亚麻酸对人体各器官及神经系统的保护作用和增强作用对糖尿病人是大有裨益的，补充α-亚麻酸可促进人体健康，预防梗塞。

DHA有助于升高高密度胆固醇(HDL)同时降低第密度胆固醇(LDL)。DHA在大脑皮层和视网膜中含量极高，在大脑和视网膜的发育中起着重要的作用，并可以有效防止健忘和老年性痴呆，延缓衰老，改善视力，增强智力和记忆力。

α—亚麻酸是ω—3PUFA（多不饱和脂肪酸）的母体，在体内可生成二十碳五烯酸(EPA)及二十二碳六烯酸(DHA)等物质。EPA在环氧化酶和脂氧化酶的作用下生成LTXAPGI3等生物活性物质。

如何利用pGL3质粒验证一段DNA序列是否具有启动子活性?

1、双荧光素酶实验验证启动子活性需要3个质粒。

2、（1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如pGL3-basic等。（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。

3、先做序列分析。看是编码序列还是非编码序列。如果是编码序列，则看所编码的蛋白质功能。非编码序列，到Google上搜promoter prediction。然后输入你的序列。可以推测该序列作为promoter的功能。 证明就是要做实验了。

4、（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。

双荧光素酶笔记

1、双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素。其中荧火虫荧光素是从甲虫(Photinus pyralis)中分离得到，分子量为61kDa；而海肾(Renilla)荧光素酶则是从海肾(Renilla reniformis)中分离，分子量为36kDa。

2、双荧光素酶指的是萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶，萤火虫荧光素酶在ATP、Mg2+和O2存在的条件下，将萤火虫荧光素催化发光。

3、构建负责表达荧光素酶的载体：在实验中，通常将感兴趣的基因调控区域与荧光素酶基因关联起来，构建成双荧光素酶报告基因的表达载体。这个基因构建过程通常通过分子克隆技术来完成。

4、双荧光素酶报告基因实验原理是利用双荧光素酶作为荧光素酶的标记来研究基因表达与调控的机制。

5、然后分别取材按照双荧光素酶试剂盒试验步骤测量不同样品中LUC及REN的荧光值并计算每种样品中LUC/REN比值。结果发现a组与b组荧光比值都很低，说明试验操作及烟草生长状态良好。

怎么预测miRNA的下游蛋白

1、预测和分析PTC中上述miRNA下游的靶基因，通过上述的表达分析和预后分析，符合筛选要求的只有miR-605-5p和miR-876-3p两个miRNA。接着，我们使用综合性靶基因预测数据库miRNet，预测这两个miRNA下游的靶基因。

2、现在有一些预测miRNA靶基因的算法和网站，免费的，例如miRtarget等，网上一搜一大把。可以用它们去预测。 但这些算法常常不是很靠谱，因此应多几种算法综合考虑。但这样仍然不是特别靠谱。

3、miRNA是通过参与调节其下游基因翻译过程面发挥其生物学功能。