m13引物-m13引物是干什么用的

摘要： 本文目录一览：1、用m13通用引物扩增blunt载体得到多条pcr产物,怎么办2、...

本文目录一览：

• 1、用m13通用引物扩增blunt载体得到多条pcr产物,怎么办
• 2、什么叫通用引物?都有哪些,如何选择?谢谢!
• 3、求助通用引物验证阳性克隆
• 4、T载上连接2000bp的目的片段,请问怎么测序,谢谢!!
• 5、连接转化成功后,用m13的引物做pcr,跑出好几条带是怎么回事
• 6、什么叫通用引物,都有哪些?

用m13通用引物扩增blunt载体得到多条pcr产物,怎么办

所以，建议用目的片段的特异引物进行PCR反应，或者直接送测序。

如果是送公司的话，可以直接测序，测序引物为M13通用引物。但是测序之前需要把挑出来的克隆，扩繁、PCR检测后再测序。测序公司再提取质粒-测序。如果是自己测序，酶切应该是检测用，阳性的质粒再测序。

如果怀疑第一次引物造成了两次引物之间相互配对引起多条带扩增，建议第二次PCR做个交叉实验做对照，就知道是不是混合引起了。如果是混合引起，建议：减少第一次引物的量，并增加循环次数，尽量消耗完首次引物。

另外，如果PCR反应后出现多条条带，有可能是退火温度低，导致产物不特意，你可以试试梯度PCR，先确定最佳的退火温度。当然有些基因比较不容易扩增，无论什么温度，基本上出现的都是很多条带。比较正常。

当引物恰好设计在重复序列中时，那么在重复序列以外的部分就会出现Twopattern的情况；所用的测序引物不纯，这种情况一般发生在PCR产物测序中。因为PCR测序一般使用的都是PCR扩增引物，如果引物本身不纯，测序结果会出现双峰。

一般这种情况下是调高退火温度。如果还是有很多条带，那么就证明你的引物特异性有问题，建议你重新设计引物，或者是切胶回收目的条带。

什么叫通用引物?都有哪些,如何选择?谢谢!

1、通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配，或者是与载体里面的一些启动、终止元件匹配。这样不管载体插入什么DN段，都可以用通用引物扩出来。通用引物可以用来测序，但是只是“通用”，也不是万能的。

2、通用引物：一般是指某基因保守序列。虽然这个基因可能是序列多变的，（如同功酶），但两侧翼序列则是保守的。利用俩侧翼保守序列设计出来的引物，称为通用引物。

3、PUC57载体通用引物是一对常用的引物，用于从PUC57载体中扩增目标DNA序列。PUC57是一种质粒载体，其中包含了多个常用的克隆位点和序列，方便进行基因克隆和DNA插入。

求助通用引物验证阳性克隆

M13R；M13F(-47)，M13R(-48)配对使用。如果做菌落PCR验证阳性克隆的话，如果只是把目的片段插入到多克隆位点处，这两对引物哪一对都可以的。

菌落PCR。设计引物扩增质粒特有的目的片段，如果阳性克隆里面有改片段，则说明转化成功。2 快抽质粒。将阳性菌落划平板，几个小时后，富集菌，然后快速抽提。看质粒大小有没有插入目的片段。3 提质粒，酶切鉴定。

导入了报告基因的大肠杆菌在含抑制性物质的培养基上就可以生长，而不含报告基因的大肠杆菌（就是转化失败的）就不能生长。这样过了两三天后，在培养基上看见的菌落就是阳性科隆。这一过程就是阳性科隆筛选。

可能原因：PCR扩增的是克隆，因为PCR验证的可靠性不稳定。

通用引物，含义为克隆位点两旁的序列匹配，目的是引扩出DN段，主要用来测序。而序列特异性引物指一种测定基因突变的方法。通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配，或者是与载体里面的一些启动、终止元件匹配。

如果你用了插入片断特异的引物扩增，那么可能是你连接时加的目的片断过多，菌表面粘附了目的片段（我曾经在没有斑的地方蘸一下，也能P出目的带），因此很可能出现阳性。

T载上连接2000bp的目的片段,请问怎么测序,谢谢!!

反向测序：就是用下游引物做测序引物往上测序。正向测序：就是用上游引物做测序引物往下测序。双向：就是正反两头同时测 测通：就是得到全场序列。一般超过1600bp的需要设计中间引物才可以测通。

如果DN段在载体上，可以用载体上两端的引物同时测序，让其中间交叉互补，便可完全测通。如果这样还读不通，可在已经测出序列的450～500个碱基处设计测序引物作进一步测序（此称为Primer Walking法），便可完全测序。

怎么把一段2000bp且含有BamHI 和EcoRI酶切位点的DN段克隆到一个质粒中及鉴定？如下：选择载体类型：选择一个常用的克隆载体，例如pUC1pGEM-T Easy或pBR322。

bp的片段属于普通片段，常见载体都可以连接上，一般的普通T载体都可以使用。

找到载体插入位点两端的序列，中间的就是你的目的片段。

测序订单上目的片段长度即你扩增的基因片段大小。

连接转化成功后,用m13的引物做pcr,跑出好几条带是怎么回事

1、cDNA？ 因为一般情况下引物二聚体的条带都是或多或少的存在的。 如果是目的条带有两条，那么可能是引物出现了错配，也有可能是本身就有两种可能。回收测序即可。

2、应该是PCR的杂带。这种情况的原因可能很多，比如引物设计的特异性不好，或者退火温度不合适等。应该是PCR的杂带。这种情况的原因可能很多，比如引物设计的特异性不好，或者退火温度不合适等。

3、非特异扩增呗，引物特异性不够高，退火温度过低。

4、温度升降过程易于达到目标值）。 如果通过改变退火温度，仍然达不到想要效果，考虑模板是否合适；此外，建议对引物重新设计，适当增长引物长度，改变引物位置。考虑到了上述因素，一般来说，没道理做不出一条带的。

5、引物设计不够特异，检查你的序列，去BLAST看看。退火温度过低，检查你的引物的Tm，检查你的程序设置。

6、验证你的引物是否特意：首先，再设计完一对因为后，要去NCBI上blast一下，看看是否会有很多条产物出现，如果产物单一的是目的片段，基本可以确定你的引物是特意的了。

什么叫通用引物,都有哪些?

通用引物：一般是指某基因保守序列。虽然这个基因可能是序列多变的，（如同功酶），但两侧翼序列则是保守的。利用俩侧翼保守序列设计出来的引物，称为通用引物。

通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配，或者是与载体里面的一些启动、终止元件匹配。这样不管载体插入什么DN段，都可以用通用引物扩出来。

通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配，或者是与载体里面的一些启动、终止元件匹配。这样不管载体插入什么DN段，都可以用通用引物扩出来。通用引物可以用来测序，但是只是“通用”，也不是万能的。

【答案】：是指与克隆载体上多克隆位点外侧一段序列互补的寡核苷酸。因为任何待测序的DN段插入多克隆位点，都可以用该段寡核苷酸作引物来引发测序反应。所以称之为通用引物。